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细胞牵张培养结合荧光染色技术

更新时间:2023-03-13      点击次数:959

细胞机械刺激培养后的荧光染色

活细胞中水的比例高,其结构通常是透明的。研究者通过使用不同染色剂可以优先染色某些部分,或观察细胞内的某些结构。例如细胞核、细胞壁,或整个细胞。

几乎所有机械传导研究的驱动目标都是细胞对机械刺激的生化反应。因其往往伴随着细胞骨架和形态的变化,有效使用细胞荧光染色技术可以对细胞信号进行重要的定性和定量观察。

然而,体外牵张培养使用的PDMS柔性基底膜可能会带来新的挑战,特别是与通常使用的培养皿或玻片相比。


拉伸膜是否会降解

使用丙酮或氯仿,腔室的硅树脂膜可能会略微膨胀;甲醇则没有问题,可以观察到将细胞平面侧放在盖玻片上的良好图像。


取材

待细胞拉伸结束,可使用手术刀或类似工具切下一块PDMS,保持包被涂层和细胞仍在其上。建议将膜切成矩形,以识别拉伸方向,避免用标签等损害样品质量。

准备好膜后,将其细胞面朝下放置在载玻片上,并使用封装介质,如PermaFluor™封片剂。


荧光染色步骤

渗透:通常使用温和的表面活性剂溶解细胞膜,以允许较大的染料分子进入细胞内部。

固定:用于在制备过程中保存细胞或组织形态。大多数固定程序都需要添加化学固定剂,可以在蛋白质之间形成化学键,以增加蛋白质的刚性。常见的固定剂包括甲醛、乙醇、甲醇等。

安装:将样品附着到载玻片上进行观察和分析。细胞可以直接生长到载玻片上,也可以使用无菌技术将松散细胞转移到载玻片。组织材料的切片也可以应用于显微镜载玻片以进行观察。

染色:对样本进行染色,以使细胞、组织、成分或代谢过程着色。该过程可能涉及将样品浸入染料溶液中,然后冲洗并在显微镜下观察样品。有些染料需要使用媒染剂——与染料反应形成不溶性有色沉淀的化学化合物。当过量的染料溶液被洗掉时,媒染的印记会留在样品上。