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使用二甲基亚砜(DMSO)冷冻保存细胞

更新时间:2023-05-12      点击次数:744

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冷冻保存是保存细胞或组织以备将来使用的一种重要的技术。最常见和可靠的冷冻保存方法之一是使用二甲基亚砜(DMSO)作为冷冻保护剂。


为什么是DMSO?

由于其在冷冻和解冻过程中保护细胞的能力,DMSO被广泛用作冷冻保护剂。它对多种细胞类型的冷冻保存有效,包括血细胞、干细胞和其他哺乳动物细胞。它可以穿透细胞膜,以防止冰晶的形成。DMSO对细胞的毒性很低,但它可以溶解和渗透可能具有细胞毒性的化合物。此外,过高浓度的DMSO会溶解细胞膜。当使其作为冷冻保护剂时,仍须小心。


如何使用DMSO?

冷冻细胞的过程涉及几个关键步骤,需要遵循这些步骤以确保细胞在解冻后保持活力。以下是一个循序渐进的指南:

1.培养:在适当的培养基中培养细胞,直到达到所需的融合度。

2.准备冷冻培养基:市场上有多种类型的冷冻培养基,为特定细胞类型选择合适的培养基很重要。冷冻介质应含有适当浓度的DMSO或其他冷冻保护剂,以在冷冻过程中保护细胞。DMSO的浓度可以根据细胞类型而变化,但典型的浓度在5-10%之间。

不同类型的细胞可能需要不同的冷冻保护剂或不同浓度的DMSO。其他常见冷冻保护剂包括甘油、乙二醇和血清。选择正确的冷冻介质对成功冷冻保存细胞至关重要。在选择冷冻介质时,重要的是要考虑细胞类型、细胞大小和膜渗透性等因素。某些细胞类型可能需要特定的添加剂或较低浓度的DMSO来避免毒性。

此外,对于某些应用,无血清培养基可能是优选的,以降低污染或免疫反应的风险。确保遵循特定细胞类型的推荐方案,并选择高质量的冷冻培养基,以确保获得最佳效果。

3.清洗:用缓冲液清洗细胞,去除任何可能干扰冷冻保存过程的微量血清或其他污染物。

4.加入冷冻培养基:将冷冻培养基加入细胞中,轻轻混合,确保细胞被均匀覆盖。

5.转移容器:将细胞转移到适当的冷冻容器,如螺旋顶部冷冻瓶。由于冷冻过程中的膨胀,建议将液体填充至小瓶体积的一半。

6.冷冻细胞:冷冻过程应缓慢进行,以尽量减少对细胞的损伤。使用速率可控的冷冻器,确保冷冻细胞的速率一致。以-1°C/min的速度冷冻细胞,直到达到-80°C。

7.储存细胞:一旦细胞被冷冻,就可以将其储存在液氮冷冻柜中,直到需要为止。