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几种常见的将细胞接种到玻片上的方法
几种常见的将细胞接种到玻片上的方法
更新时间:2025-02-24 点击次数:177
以下是几种常见的将细胞接种到玻片上的方法:
一、直接滴加法
准备工作
首先要准备好细胞悬液。细胞悬液可以通过消化贴壁细胞获得,例如对于贴壁生长的细胞,用胰蛋白酶 - EDTA 消化液处理细胞,使细胞从培养瓶壁上脱落,然后加入适量的培养基终止消化,并轻轻吹打制成单细胞悬液。对于悬浮细胞,可以直接收集培养基中的细胞,离心去除培养基中的杂质和旧培养基后,用新鲜培养基重悬细胞。
选择合适的盖玻片。盖玻片一般需要进行消毒处理,可以用 70% - 95% 的乙醇浸泡 30 分钟左右,然后晾干备用。盖玻片的大小和厚度根据实验需求选择,一般常用的尺寸为 18mm×18mm,厚度在 0.17mm 左右。
接种操作
将盖玻片放置在培养皿中。培养皿底部可以预先加入少量的培养基,以防止盖玻片移动。
用微量移液器吸取适量的细胞悬液(一般根据细胞密度和实验需求,细胞浓度可能在 1×10⁵ - 1×10⁷ 个 /ml 之间),滴加在盖玻片的一端。滴加的细胞悬液体积一般在 10 - 50μl 左右,具体体积取决于盖玻片的大小和细胞所需的接种面积。
轻轻倾斜培养皿,使细胞悬液沿着盖玻片缓慢流下,均匀地分布在盖玻片表面。然后将培养皿放入培养箱中,让细胞在适宜的温度(如 37℃)和二氧化碳浓度(一般为 5%)环境下附着和生长。
二、使用细胞爬片法
准备工作
和直接滴加法类似,准备好细胞悬液和消毒后的盖玻片。
在细胞培养容器(如培养瓶或培养皿)中加入适量的培养基,其量要能够保证细胞在接种后有足够的营养环境。
接种操作
将盖玻片平放在细胞培养容器底部。注意盖玻片之间不要相互重叠,并且要确保盖玻片表面平整。
将细胞悬液加入到培养容器中,细胞会自然地附着在盖玻片上。在培养过程中,随着细胞的生长和增殖,它们会逐渐在盖玻片上形成单层(对于贴壁细胞)或聚集(对于悬浮细胞)。
定期更换培养基,以维持良好的细胞生长环境。一般每隔 2 - 3 天更换一次培养基,直到细胞生长到合适的密度,可以进行后续的实验操作,如免疫荧光染色、细胞固定等。
三、利用细胞接种器
准备工作
准备好细胞悬液和经过消毒处理的盖玻片。同时,准备好细胞接种器,这是一种专门用于将细胞均匀接种到玻片上的工具,其设计可以精确控制细胞接种的量和分布。
接种操作
将盖玻片放置在细胞接种器的位置。接种器通常有一个固定盖玻片的装置,以确保在接种过程中盖玻片不会移动。
将细胞悬液加入到接种器的细胞悬液槽中。根据接种器的使用说明,调整细胞悬液的加入量和接种参数,如接种速度、接种压力等。
启动细胞接种器,它会将细胞悬液均匀地喷洒或涂抹在盖玻片表面。这种方法可以得到非常均匀的细胞分布,适用于一些对细胞分布均匀性要求较高的实验,如高通量药物筛选实验中的细胞接种。
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